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| 项目名称1 | 基于 CRISPR_Cas9 技术的 12 种 Knockin 实验小鼠 | 项目编号 | WLU-HW-KS-NM-2026-1088 | ||
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| 公示开始日期 | 2026-09-10 09:09:29 | 公示截止日期 | 2026-09-15 10:00:00 | ||
| 采购单位 | 西湖大学 | 付款方式 | 内贸部分：货到验收合格后付全款 | ||
| 联系人 | 中标后在我参与的项目中查看 | 联系电话 | 中标后在我参与的项目中查看 | ||
| 到货时间要求 | 内贸部分：合同签订后7 个月内 | 预算总价 | ￥ 480,000 | ||
| 收货地址 | 云谷校区 | ||||
| 供应商资质要求 |
符合《政府采购法》第二十二条规定的供应商基本条件 ; 法定代表人资格证明书 (联系人须与法定代表人一致)/投标授权委托书(联系人须与被授权人一致) (必选) ; 原厂授权书/制造商声明函 (必选) ; 被授权人社保缴纳证明 (近3个月) (必选) |
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采购清单1
| 采购物品 | 采购数量 | 计量单位 | 所属分类 |
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| 基于 CRISPRCas9 技术的 12 种 Knockin 小鼠模型定制制备 | 12 | 项 |
| 品牌 | |||
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| 规格型号 | |||
| 预算 | ￥ 40,000 | ||
| 技术参数 | 1、 1.1基因编辑方案设计 工具酶选用 SpCas9，也可根据靶点实际情况选用 eSpCas9、SpCas9HF1、Cas12a 等 Cas9 变体。针对每条靶点，需设计不少于 3 条候选 sgRNA，同时借助 CRISPOR、CHOPCHOP 等工具完成脱靶评分分析。供体模板提供两套可选方案，片段长度小于 200 bp 时采用 ssODN 方案；片段长度大于 200 bp 时采用线性化双链 DNA 或质粒方案。同源臂设计方面，采用长片段供体模板时，长同源臂与短同源臂均不低于 800 bp；采用 ssODN 模板时，两侧同源臂均不少于 60 nt。筛选策略优先采用 PCR 结合测序的方式开展直接筛选，原则上不引入抗性标记，若项目确需使用抗性标记，必须同步说明标记去除的完整实施方案。 1.2 实验操作要求 受精卵取自 SPF 级 C57BL/6J 小鼠，通过超数排卵方式获取，供体母鼠数量不少于 3 只。注射优先选择原核显微注射方式，条件适配时也可采用受精卵电穿孔方式；注射组分包含浓度不低于 50 ng/μL 的 Cas9 mRNA 或者 Cas9 蛋白、浓度不低于 50 ng/μL 的 sgRNA 以及供体 DNA。胚胎移植环节，每只受体母鼠移植存活胚胎数量不少于 20 枚，投入使用的假孕受体鼠不少于 4 只；受体选用体重 2228 g 的 ICR 或 CD1 假孕母鼠。全部动物实验需在符合 SPF 级屏障环境标准的实验动物设施内开展，投标方需提供对应动物设施的资质证明文件。 1.3 基因型鉴定要求 F0 代初筛阶段，采集出生小鼠尾尖或者耳标活检样本提取基因组 DNA 开展 PCR 鉴定，所使用引物需覆盖 5' 与 3' 同源臂的外侧区域。初筛得到的阳性个体，必须开展 Sanger 测序验证，测序范围覆盖编辑位点上下游各 500 bp。针对大片段敲入品系，需通过 qPCR 或者 ddPCR 技术确认目标片段为单拷贝插入。针对 F0 代阳性个体开展脱靶检测，可采用测序深度不低于 10× 的全基因组测序（WGS），或者针对 Top10 预测脱靶位点开展 PCR 测序验证。如存在嵌合情况，需出具 F0 代小鼠嵌合比例评估报告。 1.4 繁殖与遗传背景 利用 F0 阳性小鼠与 C57BL/6J 野生型小鼠交配繁育，获得 F1 代杂合子完成建系工作。遗传背景最低要求完成至少 1 代回交（N1）；如果甲方对品系纯度有更高要求，需回交至 N3 代或提供 SNP 分型报告。需开展遗传背景监测，提供不少于 20 个位点的微卫星标记检测报告或者 SNP 芯片遗传背景检测报告。每个品系至少繁育得到 3 只经过遗传验证的杂合子种鼠，并完成繁殖能力评估。 2、质量控制标准 2.1 分子水平质控 测序确认目标突变序列与设计方案完全一致；通过长片段 PCR 或者 Southern Blot 分别完成 5' 端、3' 端整合情况确认。在全基因组层面核查随机整合情况，可提供 WGS 数据，也可针对供体骨架序列开展 PCR 检测，确认不存在随机插入现象。脱靶突变检测要求 Top10 预测脱靶位点不存在 indel 突变；若采用 WGS 检测，需要报告全部 indel 位点以及对应位点与 sgRNA 的匹配程度。针对大片段敲入品系，需要排除染色体大片段缺失与染色体重排问题，保障染色体完整性。 2.2 动物水平质控 微生物检测结果需符合 GB 14922.2 规定的 SPF 级标准，提供第三方机构出具的检测报告。实验小鼠外观正常，无明显畸形，不存在行为异常表现。小鼠断奶前出生后存活率不低于 80%；小鼠体重与同品系野生型相比波动控制在 ±15% 以内，若超出该范围，需给出合理的解释说明。 2.3 遗传稳定性 开展传代稳定性验证，至少完成 F1 到 F2 两代传代，验证编辑位点遗传稳定。开展孟德尔遗传规律验证，F1 代小鼠互交，后代基因型比例应当符合纯合子∶杂合子∶野生型≈1∶2∶1 的预期，如出现偏离需要说明原因。 3、交付物要求 3.1 实物交付 每个品系交付不少于 3 只雄性、3 只雌性 68 周龄杂合子种鼠；若品系纯合个体具备可育能力，每个品系额外交付不少于 2 只雄性、2 只雌性纯合子小鼠。每个品系需留存生物保种材料，提供不少于 200 支冷冻精子或者不少于 50 枚冷冻胚胎。活体小鼠采用专用动物运输箱运输，冷冻保种材料采用干冰冷链方式运输。 3.2 文件交付 交付完整实验报告，完整记录 sgRNA 序列、注射工作浓度、胚胎数量、小鼠出生数量、阳性个体数量等全部实验信息；提供基因型鉴定报告，包含所有实验个体的 PCR 以及测序原始数据；提供微卫星或者 SNP 分型结果构成的遗传背景报告；提供脱靶位点检测结果形成的脱靶分析报告；提供第三方出具的 SPF 级微生物检测报告；提供品系饲养手册，手册内包含基因型鉴定引物序列、推荐 PCR 反应条件以及日常饲养注意事项；同时交付实验动物伦理审批文件复印件。 3.3 知识产权 本项目制备得到的全部小鼠品系知识产权归属甲方所有。乙方不得将本项目获得的小鼠品系用于其他商业用途，也不得私自转让给任何第三方。乙方需配合甲方准备专利申报所需的相关材料。 4、服务要求 4.1 项目管理 安排具备 5 年及以上基因编辑小鼠制备工作经验的人员担任本项目负责人。乙方每月向甲方提交书面项目进度报告。项目设置关键里程碑节点：签约后 15 天内完成方案设计确认；不晚于 3 个月完成首批 F0 代小鼠出生；不晚于 6 个月获得 F1 代小鼠；。建立微信或者邮件的周报沟通机制，到达重大项目里程碑节点时组织电话或者视频会议开展沟通。 4.2 售后与技术支持 项目质保期为交付后 6 个月，在质保期内，若品系出现非甲方原因造成的遗传问题，乙方负责免费重新制备对应品系。项目交付后提供不少于 2 年的免费技术咨询服务。面向甲方工作人员开展基因型鉴定方法培训，提供配套引物以及完整实验操作 protocol。如果甲方有扩群需求，乙方可提供繁殖技术指导，也可根据需求提供代繁服务。 5、验收标准 5.1 分阶段验收 第一阶段为方案评审，乙方提交的设计方案经甲方专家组审核通过即为该阶段验收通过。第二阶段为 F0 阳性鼠确认，每个品系至少得到 1 只测序验证阳性的 F0 代小鼠，完成阶段验收。第三阶段为 F1 杂合子确认，每个品系获得至少 3 只经过遗传验证的 F1 杂合子小鼠，完成阶段验收。第四阶段为最终验收，乙方提交全部约定交付物，所有质控检测数据全部合格，完成终验。 5.2 不合格处理 若因靶点本身技术可行性等乙方技术层面原因，造成某个品系无法完成制备，乙方应当出具书面技术分析说明，经甲方确认后，双方协商处理，可选择退还该品系对应项目费用，或者协商确定替代实施方案。如果因乙方自身原因造成项目整体交付延迟超过 30 天，甲方有权按照合同总价款每日 0.5‰的标准向乙方收取违约金。 |
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| 售后服务 | |||
西湖大学
2026-09-10 09:09:29
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